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猴B疱疹病毒荧光定量 PCR 检测试剂盒使用方法解

作者:365体育官网更新时间:2019-11-20 00:39点击次数:字号:T|T

  1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 DNAout。

  2.按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上的标签),使得两条引物的浓度均为 10 M(10 pmol/L),然后各取 50 L混合在一起,标注为引物混合物,放冰上待用。

  三、稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,

  因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成

  分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,

  只提供可以直接使用的长为 124bp 的 DNA 段作为阳性对照。3. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

  5.先将本试剂盒提供的阳性对照用超纯水 10 倍梯度稀释到 10E8 拷贝/L。放冰上待用。

  7.换枪头,在 6 号管中加入 5 L 10E7 拷贝/L 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/L 的阳性对照。放冰上待用。

  8.换枪头,从 6 号管中取 5 L 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/ L 的阳性对照。放冰上待用。

  9.换枪头,从 5 号管中取 5 L 溶液到 4 号管中,得 10E4 拷贝/L 的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

  10.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

  11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行

  具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时, 最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm,最大发射光谱在 530 nm。

  13.以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品

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